轉載 | 微生物檢驗中培養基的質(zhì)量控制
發(fā)布時(shí)間:2024-07-03 瀏覽次數:42
培養基的作用是為微生物提供生長(cháng)和繁殖所需的營(yíng)養物質(zhì)和環(huán)境條件。培養基的質(zhì)量直接關(guān)系到檢驗結果的準確性和可靠性,因此對于微生物檢驗而言,培養基的質(zhì)量控制尤為重要。培養基的主要作用有兩方面:①提供微生物生長(cháng)所需的營(yíng)養物質(zhì);②培養基具有選擇性和差異性,可以選擇特定類(lèi)型的細菌或真菌進(jìn)行培養,并區分不同種類(lèi)的微生物。因此,在微生物檢驗中,必須對培養基進(jìn)行嚴格的質(zhì)量控制,只有優(yōu)質(zhì)的培養基才能為微生物檢驗提供精準、可靠的檢測結果。
培養基的概述
培養基是用于保證微生物繁殖、鑒定、保持活力的物質(zhì),按照物理性質(zhì)可以分成液體培養基、固體培養基、半固體培養基和脫水培養基,按照化學(xué)性質(zhì)可以分成天然培養基、組合培養基和半組合培養基,按照功能可以分成選擇性培養基、鑒別培養基。不同培養基要求不同,保存方式也不同。在受熱、吸潮后,培養基極易被微生物污染或分解變質(zhì),需在避光、防潮、陰涼處儲存。
培養基的采購驗收
微生物檢驗需使用大量培養基。為提高檢驗效率,實(shí)驗室多使用商品化即用型培養基、商品化脫水合成培養基。在培養基的采購中,應選擇國內、外知名商家的產(chǎn)品,并向生產(chǎn)企業(yè)索要培養基成分名稱(chēng)、產(chǎn)品編號、批號、最終 pH 值、儲存條件、生產(chǎn)日期、有效期、質(zhì)控報告和必要的相關(guān)信息,以保證培養基的質(zhì)量。在產(chǎn)品交貨驗收時(shí),購買(mǎi)者需對產(chǎn)品包裝的完整性、生產(chǎn)日期、有效期和產(chǎn)品合格證明等進(jìn)行核驗,檢查培養基的顏色、性質(zhì)等是否符合實(shí)驗室相關(guān)標準,培養基檢驗合格后進(jìn)行入庫登記。
培養基的制備
1、配制要求
正確按要求制備培養基是做好微生物檢驗的基礎。實(shí)驗人員使用商品化脫水合成培養基配制培養基時(shí),要嚴格按照產(chǎn)品說(shuō)明進(jìn)行配制,并做好配制記錄。在配制過(guò)程中,實(shí)驗人員需要嚴格遵守相關(guān)操作標準,佩戴口罩進(jìn)行操作,避免吸入含有有毒物質(zhì)的培養基粉末,稱(chēng)量、溶解應使用專(zhuān)門(mén)的角匙,不使用金屬制品,避免金屬離子混入培養基,影響微生物生長(cháng);準確稱(chēng)量后,應先加入適量的水充分溶解,再加水至所需量進(jìn)行加熱,加熱中應不斷攪拌,防止培養基在容器底部積聚;調節pH值,分裝到比培養基體積最少大 20% 的容器中,按說(shuō)明要求進(jìn)行滅菌。粉末狀態(tài)的培養基開(kāi)封后應存放在陰涼干燥處,及時(shí)使用,環(huán)境濕度過(guò)大會(huì )使培養基出現受潮、結塊、污染等情況。對于瓊脂類(lèi)培養基,可采用沸水浴或流動(dòng)蒸汽的加熱方式進(jìn)行融化,但反復凍融只允許進(jìn)行1次。
2、配制用水
水是配制培養基不可或缺的一部分,一般使用純化水。還應定期檢查培養基配制用水的微生物污染情況,應符合純化水要求。
3、滅菌
滅菌能確保培養基質(zhì)量達標,實(shí)驗室常采用濕熱滅菌法,培養基應按照產(chǎn)品使用說(shuō)明要求進(jìn)行滅菌,每次滅菌需放置壓力蒸汽滅菌化學(xué)指示卡,驗證滅菌效果。一些培養基可以通過(guò)煮沸的方式進(jìn)行滅菌,如結晶紫中性紅膽鹽瓊脂培養基、亞硫酸鉍瓊脂培養基。實(shí)驗人員應及時(shí)將培養基從滅菌鍋中取出,盡快冷卻至所需溫度,防止加熱過(guò)度,對實(shí)驗數據造成影響;要檢查培養基的pH值、色澤、均勻度等指標,確保符合要求后貼上標簽,標明名稱(chēng)、日期、效期等基本信息。
4、制備
制備平板時(shí),將滅菌后的培養基傾注于滅菌過(guò)的干燥平皿中,在平皿中形成至少3mm的厚度,直徑90mm 的平皿通常需要加入18~20 mL 的瓊脂培養基,需要保存或培養超過(guò)48h的培養基應傾注更多培養基 。培養基冷卻凝固后應立即使用或儲存,儲存時(shí)應標記好培養基名稱(chēng)及制備日期,密封后放置在2~8 ℃冰箱中。制備斜面培養基時(shí),應先將培養基分裝到試管中,通常每管加入10mL培養基,高壓滅菌,在培養基冷卻凝固前將試管傾斜一定角度放置,待冷卻凝固后方能使用和保存。對于液體培養基,根據使用要求直接分裝至三角瓶或試管中,滅菌,冷卻至室溫直接使用或保存。
5、培養基的儲存
驗收入庫的培養基應嚴格按照生產(chǎn)廠(chǎng)家標明的儲存條件、保存期限、使用方法保存和使用。開(kāi)封后的商品化脫水合成培養基要放置在密閉容器中保存,在瓶身注明首次開(kāi)封日期 。實(shí)驗室自制培養基應避光、干燥保存,需冷藏的培養基可放置在2~8℃冰箱中保存,平板保存時(shí)間通常為2~4 周,瓶裝及試管裝培養基保存時(shí)間一般為3~6 個(gè)月,具體效期應進(jìn)行驗證。每次使用培養基前,要觀(guān)察顏色變化、流動(dòng)性、均勻性、是否結塊和是否污染等情況。如果發(fā)現培養基出現受潮、結塊、其他性狀明顯改變的情況,應停止使用。
文章來(lái)源:網(wǎng)絡(luò );環(huán)凱轉載于“藥檢社”公眾號;作者~微生物檢驗之家。
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