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食品微生物檢驗GB4789.4-2016 沙門(mén)氏菌檢驗及注意事項

發(fā)布時(shí)間:2020-09-21      瀏覽次數:23244    分享:

一、沙門(mén)氏菌生物學(xué)特性

      生物學(xué)特性:沙門(mén)氏菌屬是食源性細菌性腸胃炎的首要病原菌,屬于腸桿菌科,革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌,營(yíng)養需求不高,需氧或兼性厭氧。典型菌株多具有周生鞭毛、能運動(dòng)(除雞瘟沙門(mén)菌和雞沙門(mén)菌外)、大部分菌株產(chǎn)H2S、能分解葡萄糖并產(chǎn)氣,最適培養溫度為37℃,最適pH 7.2~7.6。耐受膽鹽,在糞便、土壤、食品、水中可生存5個(gè)月至二年之久。

      血清型:沙門(mén)菌屬由兩個(gè)種組成:腸道沙門(mén)菌(S.enterica)和邦哥沙門(mén)氏菌(S.bongori)。目前已知沙門(mén)氏菌血清型有2500多種,

      流行學(xué)特征:引起食物中毒最常見(jiàn)的沙門(mén)氏菌包括鼠傷寒沙門(mén)氏菌、腸炎沙門(mén)氏菌、豬霍亂沙門(mén)氏菌。而易引起沙門(mén)氏菌中毒的食品則有肉、蛋、乳類(lèi)等。

二、沙門(mén)氏菌的檢驗

三、養基原理解析

      1. 緩沖蛋白胨水(BPW)

      ?其成分中含有磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉,起緩沖液的作用;

      ?蛋白胨提供生長(cháng)營(yíng)養,有利于損傷沙門(mén)氏菌的復蘇。

      2. 四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB)

      ?配方中硫代硫酸鈉和碘經(jīng)氧化生成四硫磺酸鈉,它對大腸菌群有抑制作用,對沙門(mén)氏菌無(wú)影響(因沙門(mén)氏菌具有四硫磺酸酶,能分解四硫磺酸鈉,而大腸菌群沒(méi)有這種酶,故生長(cháng)受抑制);

      ?碳酸鈣為緩沖劑,可使沙門(mén)氏菌不致因酸堿度改變面死亡。

      ?由于配方含碳酸鈣,因此,該培養基配置后的最終pH不在7.0±0.2,而是偏堿性。

四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB)

      3. 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)

      ?蛋白胨提供碳源和氮源滿(mǎn)足細菌生長(cháng)的需求;乳糖是可發(fā)酵的糖類(lèi);亞硒酸氫鈉抑制革蘭氏陽(yáng)性菌和非沙門(mén)氏菌的大多數革蘭氏陰性腸道菌;磷酸鹽是緩沖劑;L-胱氨酸為還原劑。

      ?使用過(guò)程中要注意SC培養基不穩定,配置時(shí)避免過(guò)度加熱。

亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)

      4. 亞硫酸鉍瓊脂培養基(BS)

      ?配方中亞硫酸鈉可與檸檬酸鉍銨生成亞硫酸鉍,抑制革蘭氏陽(yáng)性菌和大腸菌群;硫酸亞鐵可產(chǎn)生硫化氫,并與鐵反應生成黑色沉淀。

      ?沙門(mén)氏菌在BS上的典型菌落特征:具有金屬光澤的棕色或黑色菌落。但有些菌株形成非典型菌落特征:灰綠色的菌落,周?chē)囵B基不變。

      ?BS平板應制備后避光常溫保存,并在24h內使用。

亞硫酸鉍瓊脂(BS)菌落特征

      5. HE瓊脂培養基

      ?配方中膽鹽、去氧膽酸鈉、溴麝香草酚蘭等成分可抑制革蘭氏陽(yáng)性菌生長(cháng);酸性復紅作為酸堿指示劑的同時(shí),也可抑制陽(yáng)性菌,但對陰性腸道菌無(wú)抑制作用,選擇性較弱。硫代硫酸鈉可被細菌還原產(chǎn)生硫化氫,與檸檬酸鐵銨反應生成黑色硫化亞鐵。

      ?菌落特征:藍綠色或藍色,多數菌落中心黑色或全幾乎全黑色;有些菌株為黃色,中心黑色或幾乎全黑色。

HE瓊脂菌落特征——鼠傷寒沙門(mén)氏菌ATCC14028

      6. XLD瓊脂培養基

      ?配方中木糖、乳糖和蔗糖成分作為可發(fā)酵的碳源,除志賀氏菌外,其他大多數腸桿菌均能發(fā)酵木糖;沙門(mén)氏菌發(fā)酵木糖產(chǎn)酸,形成酸性環(huán)境有利于產(chǎn)生脫羧酶使賴(lài)氨酸脫羧,從而使培養基的pH值升高向堿性轉變;在堿性條件下,硫代硫酸鈉及檸  檬酸鐵銨成分與沙門(mén)氏菌產(chǎn)生的硫化氫反應是的菌落的顏色呈黑色;去氧膽酸鹽成分可抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(cháng)。

      ?菌落特征:菌落呈粉紅色,帶或不帶黑色中心,有些菌株可呈現大的帶光澤的黑色中心,或呈現全部黑色的菌落;有些菌株為黃色菌落,帶或不帶黑色中心。

XLD瓊脂菌落特征——鼠傷寒沙門(mén)氏菌ATCC14028

       7. 沙門(mén)氏菌顯色培養基

      ?蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化鈉可維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養基的凝固劑;膽鹽抑制革蘭氏陽(yáng)性菌;選擇性添加劑增強培養基的抑制雜菌的能力;混合色素分別與沙門(mén)氏菌和大腸菌群所對應的酶發(fā)生特異性反應,水解底物,釋放出顯色基團,在淡黃色平板上沙門(mén)氏菌產(chǎn)生品紅色的菌落,大腸菌群產(chǎn)生藍綠色的菌落。

CRM004 沙門(mén)顯色培養基——鼠傷寒沙門(mén)氏菌ATCC14028

      8. 三糖鐵瓊脂培養基

      ?蛋白胨、牛肉膏粉提供氮源、維生素、礦物質(zhì);乳糖、葡萄糖、蔗糖為可發(fā)酵糖類(lèi),其產(chǎn)酸時(shí)通過(guò)酚紅指示劑測出,酸性呈黃色,堿性呈紅色;硫代硫酸鈉可被某些細菌還原為硫化氫,與硫酸亞鐵銨中的鐵鹽生成黑色硫化鐵;氯化鈉維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養基的凝固劑。

三鐵塘

      9. 賴(lài)氨酸脫羧酶試驗培養基

      ?具有氨基酸脫羧酶的細菌,能分解氨基酸使其脫羧生成胺(賴(lài)氨酸→尸胺)和二氧化碳,使培養基變堿,使指示劑顯示出來(lái)。

      ?結果判讀:陽(yáng)性為試驗管為綠色-藍綠色,對照管變黃色; 陰性為試驗管和對照管均變黃色,或均不變色。

賴(lài)氨酸脫羧酶試驗陽(yáng)性

      10. 靛基質(zhì)試驗

      ?某些細菌能分解蛋白胨中的色氨酸,生成吲哚。吲哚的存在可用顯色反應表現出來(lái)。吲哚與對二甲基氨基苯醛結合,形成玫瑰吲哚,為紅色化合物。

      ?結果判讀:陽(yáng)性為滴加靛基質(zhì)試劑后液面立即變玫紅色;陰性為滴加試劑后不變紅色。

靛基質(zhì)試驗

      11. 尿素酶試驗

      ?具有尿素酶的細菌分解培養基中的尿素,產(chǎn)生大量的氨,使培養呈堿性,酚紅指示劑在pH6.8時(shí)呈黃色,pH8.1呈粉紅色。

      ?結果判讀:陽(yáng)性為玫紅色; 陰性為淡橙紅色-淡黃色。

尿素酶試驗

      12. 氰化鉀利用試驗

      ?氰化鉀是細菌呼吸酶系統的抑制劑,可與呼吸酶作用使酶失去活性,抑制細菌的生長(cháng),但有的細菌在一定濃度的氰化鉀存在時(shí)仍能生長(cháng),以此鑒別細菌.。

      ?結果判讀:陽(yáng)性為試驗管和對照管都有生長(cháng)變渾濁; 陰性為試驗管澄清不見(jiàn)生長(cháng),對照管生長(cháng)渾濁。

氰化鉀利用陰性結果

      13. 糖(醇)發(fā)酵試驗

      ?絕大多數細菌都能利用糖(醇)類(lèi)作為碳源和能源,但是它們在分解糖(醇)的能力上有很大的差異,有些細菌能分解某種糖(醇)并產(chǎn)酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和氣體(如氫、甲烷、二氧化碳等);有些細菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。酸的產(chǎn)生可利用指示劑來(lái)斷定。

      ?(指示劑為溴甲酚紫)結果判讀:陽(yáng)性為變黃色;陰性為紫色。

甘露醇發(fā)酵試驗

      14. 沙門(mén)氏菌屬不同生化反應結果出現百分率

實(shí)驗名稱(chēng)

反應結果

沙門(mén)菌比例(%)

三糖鐵發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸

陽(yáng)性

100

三糖鐵發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)氣

陽(yáng)性

91.93

三糖鐵發(fā)酵乳糖

陰性

99.24

三糖鐵發(fā)酵蔗糖

陰性

99.5

三糖鐵產(chǎn)硫化氫

陽(yáng)性

91.6

尿素(pH7.2)

陰性

99

賴(lài)氨酸脫羧酶

陽(yáng)性

94.65

ONPG

陰性

98.44

VP

陰性

100

靛基質(zhì)試驗

陰性

98.9

      15. 沙門(mén)氏菌判定表

三糖鐵

賴(lài)氨酸脫羧酶

靛基質(zhì)

尿素(pH7.2)

補充實(shí)驗

O與H多價(jià)

結果判定

斜面

底層

硫化氫

紅色

黃色

產(chǎn)

陽(yáng)性

陰性

陰性

無(wú)需補充

均凝集

沙門(mén)氏菌屬

紅色

黃色

不產(chǎn)

陽(yáng)性

陰性

陰性

ONPG陰性

均凝集

沙門(mén)氏菌屬

黃色

黃色

產(chǎn)

陽(yáng)性

陰性

陰性

無(wú)需補充

均凝集

沙門(mén)氏菌屬

黃色

黃色

不產(chǎn)

陰性

無(wú)需測試

無(wú)需測試

無(wú)需補充

無(wú)需測試

非沙門(mén)氏菌

紅色

紅色

產(chǎn)/不產(chǎn)

陽(yáng)性/陰性

無(wú)需測試

無(wú)需測試

無(wú)需補充

無(wú)需測試

非沙門(mén)氏菌

?在接種三糖鐵瓊脂和賴(lài)氨酸脫羧酶試驗培養基的同時(shí),可直接接種蛋白胨水(供做靛基質(zhì)試驗)、尿素瓊脂(pH7.2)、氰化鉀(KCN)培養基,一定要注意是同一個(gè)菌落,這種實(shí)驗組合的優(yōu)勢是可篩選掉更多的非沙門(mén)氏菌,減少后續工作量。

?上述結果判定僅適用于典型沙門(mén)氏菌,如出現非典型結果,應進(jìn)行系統生化鑒定和血清學(xué)分型進(jìn)行確認。

      16. 071740 沙門(mén)氏菌生化鑒定盒(接種鼠傷寒沙門(mén)氏菌的結果)

       17. EasyID 沙門(mén)氏菌生化鑒定盒(接種鼠傷寒沙門(mén)氏菌的結果)

四、血清試驗

      血清學(xué)鑒定中的多價(jià)菌體(O)和多價(jià)鞭毛抗原鑒定是沙門(mén)氏菌鑒定的必做項目,血清學(xué)分型為選作試驗。實(shí)驗室必須配備沙門(mén)氏菌的多價(jià)菌體(O)和多價(jià)鞭毛(H)診斷血清。血清學(xué)試驗必須基于生化結果試驗的結果,不能單純以血清學(xué)實(shí)驗結果來(lái)報告最終。

A-F “O”多價(jià)血清凝集                     A-F “O”多價(jià)血清不凝集

五、沙門(mén)氏菌恒溫熒光核酸快速檢測

六、沙門(mén)氏菌檢驗所需培養基試劑

用途

貨號

名稱(chēng)

規格

前增菌

023130

緩沖蛋白胨水(BPW)

  瓶(干粉)250g

CP0680

緩沖蛋白胨水(BPW)

  盒(袋裝)225 mL×10袋

CP0290

緩沖蛋白胨水(BPW)

  盒(瓶裝)225 mL×6瓶

CP0560A

緩沖蛋白胨水(BPW)

  盒(管裝)9 mL×20支

023130P1

緩沖蛋白胨水(BPW)

  瓶(顆粒)250 g

二次增菌

023030

四硫磺酸鈉煌綠增菌液基礎(TTB)

  瓶(干粉)250g

SR0040

四硫磺酸鈉煌綠增菌液配套試劑

  盒(西林瓶)2×5支/盒

CP0300

四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB)

  盒(管裝)10 mL×20支

023040

亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)

  瓶(干粉)250g

CP0050

亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)

  盒(管裝)10 mL×20支

023040P1

亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)

  瓶(干粉)250g

平板分離

023052

亞硫酸鉍瓊脂(BS)

  瓶(干粉)250g

023070

HE瓊脂培養基

  瓶(干粉)250g

CP0110

HE瓊脂培養基

  盒(平板)90 mm×20

029999

木糖-賴(lài)氨酸-去氧膽酸鹽瓊脂(XLD

 瓶(干粉)250g

029999P1

木糖-賴(lài)氨酸-去氧膽酸鹽瓊脂(XLD)

 瓶(顆粒)250 g

CP0180

木糖-賴(lài)氨酸-去氧膽酸鹽瓊脂(XLD)

 盒(平板)90 mm×20

CRM004

沙門(mén)氏菌顯色培養基

 1000 mL

CP0560

沙門(mén)氏菌顯色培養基平板

 盒(平板)90 mm×20

生化鑒定

022080

三糖鐵瓊脂(TSI)

 瓶(干粉)250g

CP0080

三糖鐵斜面

 盒(管裝)20支

022110

蛋白胨水

 瓶(干粉)100g

075240

蛋白胨水

 盒(西林瓶)20支

029230

靛基質(zhì)試劑

 10 mL×1支/盒

023090

尿素瓊脂培養基基礎

 瓶(干粉)100g

029100

40%無(wú)菌尿素溶液

 盒(西林瓶)2 mL×10支

075150

尿素(凍干)

 10支(凍干)+10支(無(wú)菌水)

075330

氰化鉀生長(cháng)實(shí)驗管

 盒(西林瓶)20支

075340

氰化鉀對照管

 盒(西林瓶)20支

生化鑒定

075280

賴(lài)氨酸脫羧酶培養基

 盒(西林瓶)20支

075290

氨基酸脫羧酶對照培養基

 盒(西林瓶)20支

029110

無(wú)菌石蠟油

10 mL×1支

075090

山梨醇

 盒(西林瓶)20支

075040

甘露醇

 盒(西林瓶)20支

075180

β-半乳糖苷ONPG

 盒(西林瓶)20支

075100

衛矛醇

 盒(西林瓶)20支

075140

水楊素(水楊苷)

 盒(西林瓶)20支

075190

丙二酸鹽

 盒(西林瓶)20支

HKI 02

Easy ID沙門(mén)氏菌生化鑒定盒(不含三糖鐵)

血清學(xué)實(shí)驗驗

HM42

沙門(mén)氏菌乳膠凝集試劑盒

 50 tests

026050

半固體瓊脂

 瓶(干粉)250g

075350A

半固體瓊脂

 盒(管裝)20支

023118

沙門(mén)氏菌鞭毛誘導軟瓊脂

 瓶(干粉)250g

核酸快速檢測試劑盒

KJD05L

沙門(mén)氏菌核酸檢測試劑盒(恒溫熒光法)

 24測試/盒

HANDY PALTE微生物測試片

HP005

沙門(mén)氏菌檢測片

 20片/包



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